用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC實(shí)驗的抗體有哪些區別？今天我們一起學(xué)習一下吧！

WB（western blot，蛋白質(zhì)印跡）：是生命科學(xué)領(lǐng)域實(shí)驗中一種非常常見(jiàn)的分子生物學(xué)實(shí)驗技術(shù)，其原理是先利用SDS-PAGE將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，接著(zhù)將蛋白質(zhì)轉移到膜上，然后再利用抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測。通過(guò)分析條帶大小和顯色信號獲得目標蛋白質(zhì)在細胞或組織樣本中的表達情況。在實(shí)驗過(guò)程中由于蛋白質(zhì)在電泳前進(jìn)行了加熱變性，破壞了保持蛋白質(zhì)二級和三級結構的氫鍵，從而使得蛋白質(zhì)發(fā)生了線(xiàn)性化，需要使用識別線(xiàn)性抗原表位的抗體。因此WB抗體一般選用人工合成多肽作為抗原制備出來(lái)的抗體。

IHC(immunohistochemical，免疫組化)：是通過(guò)抗原抗體特異性免疫反應和化學(xué)/熒光呈色反應，利用標記抗體對細胞或組織內的抗原進(jìn)行研究的技術(shù)。在進(jìn)行免疫組化實(shí)驗過(guò)程中需要將組織或者細胞進(jìn)行固定，以維持細胞的形態(tài)結構和天然狀態(tài)下的一致，確保組織細胞抗原特異性的穩定。但化學(xué)物質(zhì)的固定會(huì )使蛋白質(zhì)變性，與天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)結構會(huì )存在有一定的區別，而又不同于WB中加熱變性變成線(xiàn)性的結構。

免疫組化抗體識別的是未經(jīng)加熱變性處理的抗原表位，有的屬于構象型，有的屬于線(xiàn)性的，構象型表位由于受蛋白空間結構限制，加熱變性會(huì )消失，而線(xiàn)性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和變性后的蛋白都含有。因此在做IHC/IF實(shí)驗中，最合適是用重組蛋白作為抗原制備出來(lái)的抗體，除此之外也可以是人工合成多肽作為抗原制備出來(lái)的抗體。如果所用的抗體識別的是線(xiàn)性表位(例如識別蛋白上連續的幾個(gè)氨基酸)那么這種抗體則可以同時(shí)用于IHC和WB，而如果抗體識別的是構象表位，則只能用于IHC。

IP(Immunoprecipitation，免疫沉淀)：是通過(guò)抗原抗體特異性反應來(lái)純化富集樣品中的目的蛋白的一種方法。一般情況下是使目的蛋白與其對應的抗體(protein A/G)形成免疫復合物沉淀而被收集。根據檢測目標的不同可以將IP技術(shù)分為以下3種：CHIP、RIP、Co-lP。CHIP是利用IP技術(shù)富集蛋白后檢測與其結合的DNA的量；RIP是檢測與其結合的RNA的量；Co-IP則是檢測與其結合的蛋白質(zhì)的量。

免疫沉淀是用抗體去識別結合自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此做IP實(shí)驗時(shí)抗體最好選擇由天然蛋白作為抗原制備出來(lái)的抗體，當然也可以選擇由重組蛋白作為抗原制備的抗體，注意最好不要選擇由人工合成多肽作為抗原制備的抗體，因為這種抗體識別的位點(diǎn)有可能包裹在蛋白內部而無(wú)法識別。

FC(flowcytometry，流式細胞術(shù))：是以IF為基礎發(fā)展起來(lái)的一種專(zhuān)門(mén)的細胞分析技術(shù)，主要用于細胞的分選。流式細胞中分為兩種，一種是將細胞固定之后的流式，在選用抗體時(shí)保持與IF/IHC 一致即可；另外一種是活細胞的流式，這種流式最好采用由重組蛋白作為抗原制備出來(lái)的抗體或者采用由天然蛋白作為抗原制備的抗體。

在做流式細胞實(shí)驗中由兩種標記方法，直接標記法和間接標記法。使用直接標記法時(shí)應選擇帶有熒光標記的一抗；如果研究的蛋白沒(méi)有直接標記的一抗，則需使用間接標記法，在使用間接標記法的過(guò)程中需注意要同時(shí)使用可識別靶標抗原一抗和偶聯(lián)熒光染色的二抗。

匯總：

更多有關(guān)WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC抗體的介紹，請聯(lián)系益元利康客服！