qPCR擴增過(guò)程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達到設定的熒光閾值時(shí)的所對應的擴增循環(huán)數（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡(jiǎn)單講，Ct值就是qPCR中起始模板擴增達到一定產(chǎn)物量時(shí)，所對應的循環(huán)數。那么你知道qPCR實(shí)驗中的Ct值有什么作用嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、指數擴增、模板量與Ct值的關(guān)系

理想情況下，qPCR中的基因經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)數被指數擴增而積累，擴增循環(huán)數和產(chǎn)物量之間的關(guān)系是：擴增產(chǎn)物量=起始模板量×（1+En）循環(huán)個(gè)數。然而qPCR反應并不是一直處于理想情況下，當擴增產(chǎn)物量達到“一定產(chǎn)物量"時(shí)，此時(shí)循環(huán)個(gè)數為Ct值，處于指數擴增時(shí)期。Ct值與起始模板量的關(guān)系：模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線(xiàn)性關(guān)系。起始模板量濃度越高，Ct值越小；起始模板量濃度越低，Ct值越大。

二、擴增曲線(xiàn)、熒光閾值與一定產(chǎn)物量

qPCR擴增產(chǎn)物量是以熒光信號的形式直接呈現，也就是擴增曲線(xiàn)。在PCR早期，擴增處于理想情況下，循環(huán)數較少，產(chǎn)物積累少，產(chǎn)生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區別，之后熒光的產(chǎn)生增加進(jìn)入指數期。可以在PCR反應剛處于指數期的某一點(diǎn)上來(lái)檢測PCR產(chǎn)物的量，以此作為“一定產(chǎn)物量"，并且由此來(lái)推斷模板最初的含量。因此，一定產(chǎn)物量對應的熒光信號強度，也就是熒光閾值。

在PCR的后期，擴增曲線(xiàn)不再呈現指數擴增，進(jìn)入線(xiàn)性期和平臺期。

三、Ct值的重現性

PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數擴增期，此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極hao，即同一模板不同時(shí)間擴增或同一時(shí)間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

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