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一、細胞實(shí)驗全程注意事項
1.無(wú)菌操作是重中之重,細胞培養對無(wú)菌條件比較苛刻,實(shí)驗人在進(jìn)行整個(gè)細胞實(shí)驗的無(wú)菌意識一定要強,否則一個(gè)不小心,發(fā)生細菌污染,輕則浪費細胞,重則污染整個(gè)培養箱。
2.實(shí)驗人員進(jìn)入細胞房前應該換上干凈的鞋子、白大褂、手套和口罩。
3.所有耗材放入工作臺前都需用75%酒精進(jìn)行消毒,雙手進(jìn)入工作臺前也需要用75%的酒精進(jìn)行消毒。
4.進(jìn)行實(shí)驗前應先對工作臺進(jìn)行紫外滅菌30min以上,并將所有需要用到的耗材放到工作臺上一起進(jìn)行紫外滅菌(簡(jiǎn)稱(chēng)照臺)。
5.使用酒精燈的實(shí)驗室需要特別注意安全,剛噴灑完酒精的物品不要靠近酒精燈,有生物安全柜的實(shí)驗室則不需要使用酒精燈。
6.進(jìn)行實(shí)驗前應先用酒精棉擦拭工作臺,所有操作都應在靠近酒精燈火焰下方進(jìn)行(有生物安全柜的則不需要使用酒精燈)。
7.實(shí)驗結束后應及時(shí)將垃圾處理,再用酒精棉擦拭工作臺,對工作臺進(jìn)行紫外滅菌30min以上。
二、配制基礎培養基
1. 準備材料:
50mL離心管、封口膜、鑷子、移液槍、DMEM培養液、雙抗、胎牛血清等。
2. 操作步驟:
(1)用移液槍吸取44mL的DMEM培養液,轉移至離心管中。注意槍頭不要碰到培養液瓶口。
(2)用移液槍吸取1mL的雙抗,轉移至離心管中,吹打混勻。
(3)用移液槍吸取5mL的胎牛血清,轉移至離心管中,吹打混勻。
(4)用封口膜將離心管封口,置于4℃保存。
(5) 雙抗、胎牛血清置于-20℃長(cháng)期保存,置于4℃短期保存。
(6)DMEM培養液置于4℃保存。
3. 注意事項:
(1)配制好的培養基盡快使用,一般可存放三個(gè)月左右,放置久了里面的物質(zhì)可能會(huì )失活,培養出來(lái)的細胞狀態(tài)就不這么好了。
(2)使用移液槍時(shí),注意槍頭不要碰到任何東西,如果碰到了,不要猶豫馬上丟棄。
(3)雙抗、胎牛血清應避免反復凍融,可根據需要將其分裝保存。
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