用于ELISA實(shí)驗的樣本有多種類(lèi)型，包括血清、血漿、細胞培養上清、尿液以及組織勻漿等。不同樣本類(lèi)型的預處理方法存在差異。合適的樣本預處理，是確保ELISA實(shí)驗準確性的第一步。下面讓我們一起來(lái)看看ELISA實(shí)驗三類(lèi)樣本的處理方法吧！
 

　　一、液體樣本
 

　　1. 血清
 

　　血清是ELISA實(shí)驗常用的樣本，其預處理也十分簡(jiǎn)單。使用無(wú)熱原無(wú)內毒素的試管或離心管采集血液樣本，將試管或離心管在室內溫度下放置自然凝固(視室溫環(huán)境10分鐘到2小時(shí)不等)或4℃過(guò)夜，分離出血清，(建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面，使血清能更大程度的分離出來(lái)，)，2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘)，仔細收集上清，立即進(jìn)行測定，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復凍融，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。
 

　　2. 血漿
 

　　應根據標本的要求選擇EDTA、肝素鈉、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑，使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后30分鐘內，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘)，仔細收集上清液(血漿)，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復凍融。樣本應避免溶血或高血脂。保存過(guò)程中如有沉淀形成，使用前應該再次離心。
 

　　二、固體樣本
 

　　1. 組織標本
 

　　切割標本后，稱(chēng)取1g組織，加入9ml的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘)，仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過(guò)程中如有沉淀形成，使用前應再次離心。對于植物組織，不好勻漿的話(huà)，就在液氮中充分研磨。
 

　　2. 細胞內蛋白樣本
 

　　許多待測蛋白不是分泌蛋白，而是存在于細胞內的蛋白，這個(gè)時(shí)候，要先收集細胞，洗滌干凈，再破碎細胞，離心取上清。
 

　　三、植物樣本
 

　　1. 標本的精采集及保存
 

　　取0.1g(誤差±3%以?xún)?新鮮植物組織樣本，在液氮中充分研磨；加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20℃過(guò)夜；于4℃，8000rpm，離心1小時(shí)，取上清。
 

　　上清液過(guò)C-18固相萃取柱。具體步驟是：80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開(kāi)樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過(guò)柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干，保存備用。
 

　　上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘，然后4℃離心(8000rpm，15分鐘)，取上清并暫時(shí)保存于4℃待用。
 

　　2. 植物標本中相關(guān)酶或蛋白的測定(粗提取)
 

　　新鮮植物組織請在液氮中充分研磨；加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液)，請于4℃，8000rpm，離心30分鐘，取上清并暫時(shí)保存于4℃待用。
 

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