百奧醫藥骨組織解離試劑盒可用于骨組織樣本單細胞懸液制備，可廣泛應用于高通量單細胞測序等相關(guān)科學(xué)研究實(shí)驗。那么你知道百奧醫藥骨組織解離試劑盒的使用方法是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、使用方法：

1、用滅菌的剪刀或手術(shù)剪將組織切成小塊

2、在冰上將組織塊兒加入適當的RPMI 1640培養基或PBS緩沖液，清洗至少3次，去除多余xue漬和雜質(zhì)

3、將洗干凈的組織剪碎，剪的越碎越好，增大和消化試劑接觸的面積。加入適量的消化試劑。顛倒混勻。

4、放置于酶作用的最佳溫度下，一般37°C，進(jìn)行孵育，每隔5分鐘震蕩混勻。

5、不同類(lèi)型、狀態(tài)的組織消化時(shí)間不同，每隔一定的時(shí)間質(zhì)檢一次細胞懸液，根據細胞總量及活性等確定消化停止時(shí)間。對于某些腫瘤組織或其他較致密結締組織，消化時(shí)間4~48h，對于容易消化的組織可以采用37°C 消化15-45分鐘，也可以根據具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動(dòng)即成細胞團或單個(gè)細胞，可以認為已消化充分。

6、消化完成后，用合適的細胞篩進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液。

7、讓細胞沉降并倒出多余的含酶液體。

8、用PBS緩沖液洗滌并重復2-3次。加入適當的培養基或緩沖液，重懸細胞。

9、用細胞計數儀對細胞懸液進(jìn)行質(zhì)控并記錄

二、測試效果

使用該組織解離試劑盒將新鮮人骨組織消化解離為單細胞懸液，利用CountStar全自動(dòng)細胞熒光分析儀檢測細胞活性（AO/PI染色）、結團率、活細胞濃度、細胞直徑等參數。然后進(jìn)行10x Genomics平臺單細胞建庫測序，獲取數據。

制備的單細胞懸液質(zhì)量較高，活性可達83.85%，結團率僅為3.35%，其他參數也均能滿(mǎn)足高通量單細胞測序研究相關(guān)實(shí)驗要求。

從曲線(xiàn)圖、捕獲細胞數、測序深度、獲得基因數結果初步可以看出，數據結果比較理想，例如基因中位數均在1,400個(gè)左右，較為理想。

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