CCK-8檢測實(shí)驗（細胞活力檢測實(shí)驗）是一種常用的細胞增殖和毒性檢測方法，通過(guò)測量細胞內酶活性的變化，從而來(lái)評估細胞的活力。CCK-8檢測是一種簡(jiǎn)便、快速、高靈敏度的細胞活力檢測方法，適用于多種細胞類(lèi)型和實(shí)驗條件。本文主要從實(shí)驗原理、實(shí)驗步驟、注意事項等方面來(lái)介紹該實(shí)驗。

一、實(shí)驗原理

該試劑中含有WST-8，它在電子載體（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞線(xiàn)粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚染料formazan，生成的甲瓚物formazan的數量與活細胞的數量成正比，因此可以用這一特性直接進(jìn)行細胞增殖和毒性分析。

活力計算:

細胞活力＊(%）=[A(加藥)—A（空白）]/［A（0加藥）—A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白):具有培養基和CCK8溶液而沒(méi)有細胞的孔的吸光度

A（0加藥）:具有細胞、CCK8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力。

二、實(shí)驗步驟

1. 實(shí)驗前將細胞接種96孔板，每組鋪5個(gè)平行孔（孔的外圍一圈加PBS，以防邊緣效應影響實(shí)驗組），在96孔板中配置100μl的細胞懸液，將培養板在培養箱預培養24小時(shí)。

2. 進(jìn)行CCK-8實(shí)驗，棄掉孔內原有培養基并每孔加入新配制的含有終體積1/10 CCK-8試劑盒的完quan培養基，37℃細胞培養箱內孵育1-4hr（根據細胞量決定時(shí)間長(cháng)短，細胞越多OD值越大且隨著(zhù)孵育時(shí)間的延長(cháng)OD值也會(huì )變大，最適OD值應保持在2以?xún)龋?/span>

3. 在450nm處測定吸光值。

4. 計算細胞增殖率：（實(shí)驗組OD-空白組OD）/（對照組OD-空白組OD）

三、注意事項

1. 細胞接種密度要適中，過(guò)低或過(guò)高的密度都會(huì )影響實(shí)驗結果的準確性。

2. CCK-8試劑的添加量要適量，過(guò)多或過(guò)少都會(huì )影響實(shí)驗結果。

3. 培養時(shí)間要適當，過(guò)長(cháng)或過(guò)短的培養時(shí)間都可能導致實(shí)驗結果的偏差。

4. 測定吸光度時(shí)，要確保酶標儀的校準準確，以獲得可靠的實(shí)驗數據。

5.如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà)，可在加CCK8之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

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