一、DH5α

DH5α是大腸桿菌(Escherichia coli)的一種感受態(tài)細胞系，通常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗中。這些細胞被設計成對外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉化和質(zhì)粒擴增等實(shí)驗中被廣泛使用。DH5α感受態(tài)細胞對于吸收外源DNA特別有效，這使得它們在基因工程和分子生物學(xué)研究中成為常見(jiàn)的實(shí)驗室工具。

二、操作步驟

1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養基中37℃搖床培養過(guò)夜（約16小時(shí)）；

2、取1ml過(guò)夜培養物轉接于100ml LB培養基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養約2.5-3小時(shí)（250-300rpm）；

3、將0.1M CaCl2溶液置于冰上預冷；以下步驟需在超凈工作臺和冰上操作；

4、吸取1.5ml培養好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；

5、4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；

6、棄去上清，加入100微升預冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細胞重新懸浮，在冰放置20分鐘；

7 、4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；

8 、棄去上清，加入100微升預冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細胞重新懸浮；

9 、細胞懸浮液可立即用于轉化實(shí)驗或添加冷凍保護劑（15% - 20%甘油）后超低溫冷凍貯存備用（－70℃）。

三、大腸桿菌檢測試劑盒推薦

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