細胞轉染的影響因素
 

　　做轉染實(shí)驗時(shí)，除了選擇合適的轉染試劑，還需要對轉染條件進(jìn)行優(yōu)化，以便獲得轉染效果。那么你知道影響細胞轉染的因素有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！
 

　　一、細胞狀態(tài)
 

　　細胞狀態(tài)不好，會(huì )導致轉染效率低下，因此，轉染前要求良好的細胞狀態(tài)和細胞活性。轉染時(shí)細胞密度以70~90%(貼壁細胞)或2×106~4×106細胞/mL(懸浮細胞)為宜，一般不建議用生長(cháng)幾天或傳代次數少的細胞做轉染，細胞密度過(guò)高會(huì )嚴重影響細胞狀態(tài)(周期進(jìn)程阻滯，凋亡增加等)，細胞密度過(guò)低可能會(huì )導致生長(cháng)異常或者由于轉染試劑對細胞的毒性導致細胞死亡。
 

　　二、質(zhì)粒
 

　　為實(shí)現高效率、低毒性的轉染，應使用高質(zhì)量的質(zhì)粒，結構完整，純度高，無(wú)污染，無(wú)菌，無(wú)內毒素。如果質(zhì)粒不純，帶少量鹽離子，蛋白、代謝物污染等都會(huì )顯著(zhù)影響轉染復合物的有效形成；而含有內毒素的質(zhì)粒對細胞存在很大的毒性作用。另外抗生素一般對真核細胞無(wú)毒，但轉染過(guò)程中細胞通透性增加，使抗生素進(jìn)入細胞，從而降低細胞活性，導致轉染效率低下。
 

　　三、載體構建
 

　　若質(zhì)粒基因產(chǎn)物對細胞有毒害作用，則轉染難以成功。轉染載體的構建選擇可調控，強度適合的啟動(dòng)子很重要，可以用空載體或相同載體的其他基因作為對照排除毒性對細胞的影響。
 

　　四、轉染試劑和DNA的比例
 

　　許多轉染方法都需要優(yōu)化轉染試劑和DNA的比例。不同細胞系轉染效率通常不同，細胞系的選擇通常根據實(shí)驗需要確定，轉染試劑也應根據實(shí)驗要求和細胞特性選擇合適的，然后進(jìn)行預實(shí)驗，選擇合適濃度的DNA，調整DNA與轉染試劑的比例，以獲得較高的轉染效率。
 

　　五、轉染后篩選時(shí)間
 

　　轉染后篩選不能太早或太晚，因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷大，增殖較慢，太晚可能會(huì )被沒(méi)有外源基因轉入的細胞淹沒(méi)，導致篩選不出陽(yáng)性克隆。因此一般是在轉染48h之后開(kāi)始加抗生素篩選。
 

　　六、污染
 

　　細胞污染會(huì )造成轉染效率低下，為防止細胞污染應注意避免培養物被細菌、真菌、病毒、支原體或其他細胞種類(lèi)等污染；避免培養的細胞被支原體污染，必要時(shí)進(jìn)行支原體污染的常規篩查；避免與實(shí)驗室同時(shí)培養的其他種類(lèi)細胞發(fā)生交叉污染。
 

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