懸浮細胞傳代是一項重要的實(shí)驗操作,它可以幫助研究人員擴增和維持細胞株。懸浮細胞如何進(jìn)行傳代呢？

一、懸浮細胞的傳代

懸浮細胞傳代比貼壁細胞傳代稍微簡(jiǎn)單一些。由于細胞已經(jīng)在生長(cháng)培養基中懸浮，因此無(wú)需通過(guò)酶的作用使其從培養容器表面脫離，整個(gè)過(guò)程較為迅速，對細胞的損傷也較小。懸浮生長(cháng)細胞的傳代培養要比貼壁細胞簡(jiǎn)單得多，通常有兩種方法。

1. 直接給帶傳代的培養瓶中補充一定量的新鮮.培養基，然后將進(jìn)行分裝。

2. 先通過(guò)離心棄掉營(yíng)養匱乏的舊培養基，然后再用適量的新鮮培養基重懸細胞沉淀，最后將其分裝至培養瓶中即可。

懸浮細胞傳代后的延滯期一般比貼壁細胞短。

二、所需材料

★ 裝有懸浮細胞的培養容器

★ 完quan生長(cháng)培養基，預熱至37%

★ 37°培養箱，充有二氧化碳濃度為5%的濕化空氣

三、懸浮細胞傳代流程

所有與細胞接觸的溶液和設備均應為無(wú)菌狀態(tài)必須采用正確的無(wú)菌技術(shù)，并且在超凈臺內進(jìn)行。傳代應在細胞處于對數期、未達到匯合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行。達到匯合狀態(tài)時(shí)，懸浮培養的細胞會(huì )聚集成團塊，轉動(dòng)培養瓶時(shí)培養基會(huì )變得渾濁。傳代前所建議的最大細胞密度隨細胞系不同而有所差異;詳細信息請參閱針對具體細胞的立品說(shuō)明書(shū)或操作手冊。

四、懸浮細胞的傳代方法

1、直接傳代法

①待懸浮細胞長(cháng)滿(mǎn)至80%-90%左右 (細胞懸液變黃)，即可傳代；

②用吸管吸棄細胞懸液1/2~ 2/3 ；

③加入適量的新鮮培養基，繼續培養。

2、離心傳代法

①將細胞懸液轉移到離心管內；

②150g離心5min，棄上清；

③使用新鮮的培養基重懸細胞;

④吸管吸取適量細胞懸液，裝入新的培養瓶，再加入適量的新鮮培養基，繼續培養。

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